La menta es una planta herbácea de hojas verdes brevemente pecioladas que poseen un fuerte aroma mentolado, es proveniente de regiones tropicales y es cultivada en Paraguay desde la década de los 70. Esta especie tiene una gran variedad de usos como descongestivo nasal, perfumes, infusiones para té, agregado para la yerba mate, entre otros. Su cultivo in vitro permite la obtención de plantas sanas, libres de enfermedades y disponible para todo el año. La obtención de protocolo de aclimatación es fundamental para llevar a campo que sirva de alternativa para los productores. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la aclimatación y desarrollo de plántulas de Mentha arvensis, obtenidos por propagación in vitro y aclimatados en diferentes sustratos. Se utilizaron diferentes sustratos para la aclimatación, consistentes en sustrato comercial, sustrato perlita y una mezcla en igual proporción de ambos tipos de sustrato, donde las variables evaluadas fueron el porcentaje de supervivencia, la altura promedio y el número promedio de los brotes. Los datos obtenidos fueron analizados con el software estadístico InfoStat con un nivel de confianza del 95%. Los resultados de porcentaje de supervivencia no mostraron diferencias significativas entre los tratamientos utilizados, presentando en general una tasa de sobrevivencia del 95%. La altura promedio y el número de brotes por planta si se vio afectada, siendo el tratamiento 2 (sustrato comercial 100%) y el tratamiento 3 (sustrato comercial 50% + sustrato perlita 50%) los que proporcionaron mejores condiciones para el crecimiento y desarrollo de las plantas.